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一、操作前準(zhǔn)備
1、清洗與消毒
拆解清洗：將反應(yīng)器各部件(罐體、管路、電極等)拆解后，分別用洗潔精和1%氫氧化鈉溶液浸泡清洗，純化水沖洗10次以上。
消毒處理：清洗后的部件用消毒液(按比例稀釋)浸泡30分鐘，晾干后避免直接接觸表面。
傳感器維護(hù)：pH電極浸泡于飽和KCl溶液，溶氧(DO)電極更換電解液并排除氣泡，極化6小時(shí)以上。
2、罐體裝配
密封安裝：將罐蓋與罐體底座對齊，用內(nèi)六角工具對角均勻擰緊螺絲，確保密封性。
管路連接：通過硅膠管或快接頭連接補(bǔ)料瓶、排氣瓶、取樣瓶等，電極插入對應(yīng)接口后手動擰緊。
二、上罐操作
1、細(xì)胞接種
將預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞懸液混合均勻后計(jì)數(shù)，轉(zhuǎn)移至接種瓶并與反應(yīng)器進(jìn)液管無菌連接。
使用壓縮空氣將細(xì)胞懸液壓入反應(yīng)器，避免細(xì)胞沉降結(jié)團(tuán)。
2、參數(shù)初始化
環(huán)境設(shè)置：溫度設(shè)為37℃(哺乳動物細(xì)胞)，溶氧40%，pH 7.0左右，通過控制面板啟動自動調(diào)節(jié)。
補(bǔ)料與通氣：蠕動泵控制補(bǔ)液速率，進(jìn)氣系統(tǒng)調(diào)節(jié)氧氣壓力至0.1MPa，確保溶氧穩(wěn)定。
三、培養(yǎng)過程控制
1、動態(tài)監(jiān)測
傳感器聯(lián)動：實(shí)時(shí)監(jiān)測溫度、pH、DO等參數(shù)，控制器自動調(diào)節(jié)攪拌速度(100–300 rpm)和補(bǔ)料速率。
在線取樣：每24小時(shí)取樣檢測細(xì)胞密度和代謝狀態(tài)，取樣后管路末端浸入75%酒精防止污染。
2、污染防控
操作全程保持無菌環(huán)境，使用火焰消毒連接口，避免外界雜質(zhì)進(jìn)入。
四、下罐操作與維護(hù)
1、終止培養(yǎng)
關(guān)閉自動控制模塊，通過壓縮空氣將培養(yǎng)液排入廢液桶，斷開電極連接。
2、清洗與存儲
拆卸罐體組件，用純化水沖洗后以0.1M NaOH溶液浸泡過夜，徹底去除生物殘留。
干燥后存放于通風(fēng)處，電極單獨(dú)存放于專用包裝盒。
五、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
1、密封性檢查：裝配后需進(jìn)行壓力測試，避免培養(yǎng)過程中泄漏。
2、參數(shù)校準(zhǔn)：每次使用前需校正pH和DO電極，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。
3、規(guī)模放大：遵循恒定的通氣體積與液體體積比(VVM)，保障溶氧傳遞效率一致。
通過以上步驟，不銹鋼細(xì)胞生物反應(yīng)器可實(shí)現(xiàn)從實(shí)驗(yàn)室到中試規(guī)模的穩(wěn)定細(xì)胞培養(yǎng)，適用于抗體生產(chǎn)、疫苗開發(fā)等高精度生物工藝。
